2 × Pfu PCR Mix

Fahatokisana avo lenta indrindra polyesteria Taq DNA.

Ny Pfu DNA Polymerase dia naseho avy tamin'i E.coli niaraka tamin'ny genan'ny Pyrococus Furiosis DNA Polymerase ary nodiovina sy nosarahan'ny fanadiovana tsanganana maro. Satria i Pfu dia manana hetsika exonuclease 3'-5 ", dia afaka manatsara ny fizotran'ny fanamafisana ny ADN izy io, fa ny Taq DNA Polymerase nentindrazana kosa tsy afaka. Na dia misy polymerase ADN Taq hafa aza toa ny Vent, Deep Vent, Tli, UITma, sns. Ny Pfu DNA Polymerase dia manana fitoniana mafana kokoa noho ny polymerase DNA Taq mahazatra, ary afaka mitazona hetsika mihoatra ny 90% amin'ny 95 ° C mandritra ny adiny iray.

Fantsona Pfu PCR Mix (fantsom-pamokarana teknolojia avo lenta)

■ Ny Pfu PCR Mix dia nanatsara ny fahamendrehana sy ny fahatsapana ny valin'ny PCR ary afaka manitatra modely sarotra misy atiny GC ambony, rafitra faharoa ary ny toy izany. Raha ambany ny dika mitovy amin'ny lasibatra kendrena 2 dia azo haamafisina, hiantohana ny valim-panandramana marina kokoa.

■ Ny raikipohy tsy manam-paharoa Pfu MasterMix dia mahatonga ny rafitry ny fihetsika iray ho marin-toerana tokoa, ary ny hetsika dia tsy hisy fiantraikany amin'ny famerenam-bolo na fitehirizana maharitra amin'ny 4 ° C.

■ Ny vahaolana mifangaro PCR efa voaomana sy mahomby efa nomanina dia afaka manao ny asa haingana sy tsotra, mampihena be ny hamafin'ny asa sy ny hadisoana amin'ny santionany. Ny enhancer sy optimizer PCR avo lenta dia tafiditra ao anaty mix ihany koa, izay mampihena ny fepetra takiana amin'ny toe-javatra PCR.

■ Ity vokatra ity dia samy manana rafitra misy loko sy tsy misy loko. Ny vokatra PCR Mix misy loko dia azo alefa mivantana aorian'ny PCR, tsy ampiana buffer santionany.

Saka. tsy misy	Haben'ny fonosana
4992780	1ml
4992781	5 * 1ml
4992782	1ml
4992906	5 * 1ml

Mandefasa mailaka aminay

Product Detail

Workflow

FAQ

Product Tags

Famaritana ny hetsika

Ny fiasan'ny singa 1 (U) Pfu DNA Polymerase dia faritana ho toy ny habetsaky ny anzima ilaina amin'ny fampidirana 10 nmol deoxynucleotides ho zavatra tsy voavaha asidra amin'ny 74 ° C ao anatin'ny 30 min amin'ny alàlan'ny fampiasana ny ADN sperman'ny salmona ho template / primer.

Fanaraha-maso kalitao

Ny fahadiovan'ny SDS-PAGE detection dia mihoatra ny 99%; Tsy misy hetsika nuclease exogenous hita; Ny fototarazon'ny kopia tokana amin'ny genome olombelona dia azo ampitomboina amin'ny fomba mahomby; Tsy misy fiovana lehibe eo amin'ny hetsika rehefa voatahiry amin'ny hafanan'ny efitrano mandritra ny herinandro.

Parameter teknika lehibe

Izy io dia manana hetsika 3'-5 "exonuclease ary tsy misy hetsika exonucilfa 5'-3". Ny hafainganam-pandehan'ny fanamafisana ny ADN dia ambany noho ny an'ny Taq polymerase, ary amin'ny ankapobeny ny hafainganam-pandehan'ny anzima Pfu dia 0,5-1 kb isa-minitra. Ny fitoniana hafanan'ny Pfu dia tsara kokoa noho i Taq. Ho an'ny modely misy atiny GC avo lenta, ny mari-pana denaturation dia azo ampitomboina 98 ° C, izay tsy misy fiatraikany amin'ny asan'ny Pfu polymerase. Ny vokatra PCR dia mifarana tampoka, izay azo ampiana amin'ny 3'-dA overhangs alohan'ny hikambana amin'ny vector TA na cloned miaraka amin'ny vector blunt-end

Fampiharana

Izy io dia azo ampiasaina amin'ny fanamafisana ny ADN, toy ny cloning expression, ny mutation, ny polymorphism (SNP), ary ny fanamboarana ny farany.

Ny vokatra rehetra dia azo namboarina ho an'ny ODM / OEM. Ho an'ny antsipiriany,azafady tsindrio ny Serivisy namboarina (ODM / OEM)

Teo aloha: Kit Mutagenesis mitarika tranokala haingana

Manaraka: Kit PCR Ultra HiFidelity

Mampiasà ADN genomika ho maodely hanamafisana ny sombiny 1kb.
Aorian'ny fanehoan-kevitry ny PCR dia makà 5 μl hahitana ny electrophoresis.

F: Tsy misy tarika fanamafisana

Modely A-1

■ Ny môdely dia misy fahalotoana proteinina na mpanakana Taq, sns .——Ataovy ny môdely ADN, esory ny fahalotoan'ny proteinina na esory ny modely ADN miaraka amina kitapo fanadiovana.

■ Tsy feno ny denaturation an'ny môdely —— Ampitomboina araka ny tokony ho izy ny mari-pana amin'ny denaturation ary halavaina ny fotoana maha-denaturation.

■ Fanimbana ny môdely —— Amboary indray ny modely.

A-2 Primer

■ Ratsy kalitaon'ny primera ——Avao-synthesize ny primer.

■ Fanapotehana ny primer ——Aokao ireo primera fitanana avo lenta ho kely kely hitehirizana azy. Sorohy ny hatsiaka be loatra sy ny fanalefaka na 4 ° C maharitra maharitra.

■ Famolavolana primer tsy mety (oh: ny halavan'ny primer tsy ampy, dimer miforona eo anelanelan'ny primers sns.

A-3 Mg²⁺fitanana

■ Mg²⁺ ambany loatra ny fifantohana —— Ampitomboy tsara ny Mg²⁺fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-4 mari-pana amin'ny Annealing

■ Ny mari-pana amin'ny annealing avo dia misy fiatraikany amin'ny famehezana ny primer sy ny modely. ——Ahena ny mari-pana mampifangaro ary manatsara ny toe-javatra amin'ny alàlan'ny gradient 2 ° C.

A-5 Fotoana fanitarana

■ Fotoana fanitarana fohy —— Ampitomboy ny fotoana fanitarana.

F: Diso tsara

Phenomena: ny santionany ratsy dia mampiseho ireo tarika lasibatra kendrena.

A-1 Fandotoana ny PCR

■ Fandotoana ny filaharan'ny tanjona na ny fanamafisana ny vokatra —— Tandremo sao ampifangaroina ny santionany misy ny filaharana kendrena ao amin'ilay santionany ratsy na arotsaka ao anaty fantsona centrifuge. Ny reagents na ny fitaovana dia tokony autoclaved hamongorana ny asidra niokika misy, ary ny fisian'ny fandotoana dia tokony ho faritana amin'ny alàlan'ny fanandramana fanaraha-maso ratsy.

■ Fandotoana reagent ——Aroquot ny reagents ary tahirizo amin'ny hafanana ambany.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ ambany loatra ny fifantohana —— Ampitomboy tsara ny Mg²⁺ fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

■ Famolavolana primer tsy mety, ary ny filaharana kendrena dia misy homolojia miaraka amin'ny filaharana tsy kendrena. —— primera famolavolana indray.

F: fanamafisana tsy voafaritra

Phenomena: Ny tariby fanamafisana PCR dia tsy mifanaraka amin'ny haben'ny antenaina, na lehibe na kely, na indraindray samy misy tarika fanamafisana manokana sy tarika fanamafisana tsy voafaritra.

Primer A-1

■ Tsy fahaiza-manao voalohany

—— Primera famolavolana indray.

■ Avo loatra ny fatran'ny primer ——Mampiakatra tsara ny mari-pana amin'ny denaturation ary mampaharitra ny fotoana maha-denaturation.

A-2 Mg²⁺ fitanana

■ Ny Mg²⁺ avo loatra ny fifantohana ——Ahenao tsara ny fatran'ny Mg2 +: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-3 Polymerase maharitra

■ Fatra anzima tafahoatra ——Mampihena ny habetsaky ny anzima amin'ny elanelam-potoana 0,5 U.

A-4 mari-pana amin'ny Annealing

■ Ambany loatra ny mari-pana amin'ny rindrambaiko —— Ampitomboy amin'ny tokony ho izy ny mari-pana fampidirana an-trano na ampiharo ny fomba fanaingoana dingana roa

Kitapo PCR A-5

■ Kitapo PCR be loatra ——Mampihena ny isan'ireo tsingerina PCR.

F: Tarika mitambatra na manosotra

Primer A-1——Miavaka manokana —— Mamolavola indray ny primer, manova ny toerana sy ny halavan'ny primer hanatsarana ny mampiavaka azy; na manao PCR akany.

ADN modely A-2

——Tsy madio ny môdely ——Ataovy ny môdely na esory ny ADN miaraka amin'ny kitapo fanadiovana.

A-3 Mg²⁺ fitanana

——Mg²⁺ avo loatra ny fifantohana ——Ahenao tsara ny Mg²⁺ fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-4 dNTP

——Ny haavon'ny dNTP dia avo loatra ——Mampihena araka ny tokony ho izy ny fifantohan'ny dNTP

A-5 mari-pana amin'ny Annealing

——Tena ambany ny mari-pana amin'ny fanaingoana —— Ampitomboy amin'ny tokony ho izy ny mari-pana amin'ny fampidirana annealing

A-6 tsingerina

——Toy ny tsingerina be loatra—— Araraoty ny isan'ny tsingerina

F: Ohatrinona ny ADN modely tokony ampiana ao anaty rafitra fanehoan-kevitra 50 μl PCR?

F: Ahoana ny fanamafisana ireo sombina lava?

Ny dingana voalohany dia ny mifidy ny polymerase mety. Ny polymerase Taq tsy tapaka dia tsy afaka manamboatra noho ny tsy fisian'ny hetsika exonuclease 3'-5 ', ary ny tsy fitoviana dia hampihena ny fahombiazan'ny sombintsombiny. Noho izany, ny polymerase Taq mahazatra dia tsy afaka manatsara ny sombiny kendrena lehibe kokoa noho ny 5 kb. Taq polymerase miaraka amina fanovana manokana na polymerase fidelity avo lenta hafa dia tokony hofidina hanatsarana ny fahombiazan'ny fanitarana ary hahafeno ny filan'ny fanamafisana sombina lava. Ho fanampin'izany, ny fanamafisana ireo sombintsombiny lava dia mitaky fanitsiana mifanaraka amin'ny famolavolana primer, ny vanim-potoana denaturation, ny fotoana fanitarana, ny buffer pH, sns. Matetika, ny primera misy 18-24 bp dia mety hitarika vokatra tsara kokoa. Mba hisorohana ny fahasimban'ny môdely dia tokony ahena ho 30 seg na latsaka isaky ny tsingerina ny fotoana anaran'ny denaturation, ary ny fotoana hampiakarana ny maripana mankany 94 ° C alohan'ny tokony hampitomboana 1 min. Ankoatr'izay, ny fametrahana ny mari-pana fanitarana eo amin'ny 68 ° C ary ny famolavolana ny fotoana fanitarana arakaraka ny tahan'ny 1 kb / min dia afaka miantoka ny fanamafisana ny sombiny lava.

F: Ahoana no hanatsarana ny fahatokisan'ny PCR?

Ny tahan'ny lesoka amin'ny fanamafisana PCR dia azo ahena amin'ny alàlan'ny fampiasana polymerases ADN isan-karazany miaraka amin'ny fahamendrehana ambony. Anisan'ireo polymerase Taq ADN hita hatreto, ny anzima Pfu dia manana ny tahan'ny lesoka ambany indrindra sy ny fahatokiana avo indrindra (jereo ny tabilao mifatotra). Ankoatry ny fifantina anzima, ny mpikaroka dia afaka mampihena bebe kokoa ny tahan'ny mutation PCR amin'ny alàlan'ny fanatsarana ny fepetra fanehoan-kevitra, ao anatin'izany ny fanamafisana ny fomban'ny buffer, ny fatran'ny polymerase azo hafanaina ary ny fanamafisana ny isa amin'ny tsingerina PCR.

Soraty eto ny hafatrao ary andefaso aminay