2 × Taq Platinum PCR Mix

Ultra-pure HotStart polymerase ADN azo ianteherana avo indrindra.

Taq Platinum DNA Polymerase dia polymerase HotStart Taq novaina simika miaraka amin'ny hetsika 3'-5 "exonuclease ary hetsika 5'-3" exonuclease. Ny hetsika anzima an'ny Taq Platinum DNA Polymerase dia voasakana amin'ny hafanan'ny efitrano. Ny asany dia azo ampiasaina aorian'ny fanamafisana ny 94 ° C mandritra ny 5-10 min, ka hialana amin'ny fanamafisana tsy voafaritra ateraky ny fanaovana annealing tsy manokana na primer dimer amin'ny mari-pana ambany alohan'ny fihodinan'ny valin'ny PCR, ary manatsara be ny fahatsapana ary ny maha-manokana ny fihetsika PCR. Ho fanampin'izany, ny Taq Platinum DNA Polymerase dia manana fahatokiana tena avo indrindra, izay faharoa tsara indrindra amin'ny Pfu polymerase. Ny hafainganan'ny fanitarana ny polymerisation ADN dia haingana kokoa noho ny polymerase Pfu ary avo kokoa ny fahombiazan'ny fanamafisana.

Saka. tsy misy Haben'ny fonosana
4992789 5x1ml
4992790 5 × 1 ml

Product Detail

Ohatra amin'ny fanandramana

FAQ

Product Tags

Famaritana ny hetsika

Singa 1 (U) Taq Platinum DNA Polymerase activité dia faritana ho toy ny habetsaky ny anzima takiana amin'ny fampidirana 10 nmol deoxynucleotides ho lasa zavatra tsy voavaha asidra amin'ny 74 ° C ao anatin'ny 30 min amin'ny alàlan'ny ADM sperman'ny salmona mihetsika ho template / primer.

Fanaraha-maso kalitao

Ny fahadiovan'ny SDS-PAGE detection dia mihoatra ny 99%; Tsy misy hetsika nuclease exogenous hita; Ny fototarazon'ny kopia tokana amin'ny genome olombelona dia azo ampitomboina amin'ny fomba mahomby; Tsy misy fiovana lehibe eo amin'ny hetsika rehefa voatahiry amin'ny hafanan'ny efitrano mandritra ny herinandro.

Parameter teknika lehibe

Izy io dia manana hetsika 5'-3 "exonuclease ary hetsika 3'-5" exonuclease, ary ny fahatokisany dia eo akaikin'ny Pfu polymerase. Ny hafainganan'ny fanitarana Taq Platinum Polymerase dia haingana kokoa noho ny Pfu polymerase ary avo kokoa ny fahombiazan'ny fanamafisana. Ny vokatra PCR dia azo ampifandraisina mivantana amin'ny tendrony farany na cloned miaraka amin'ny vector TA. Raha mila hatsaraina ny fahaizan'ny cloning dia asaina manadio aloha ianao ary asio 3'-dA overhangs alohan'ny hananganana azy ao anaty vector TA.

Taq Platinum MasterMix (Tube nasionaly teknolojia avo lenta)

■ Ny Taq Platinum MasterMix dia nanatsara ny fahamendrehana sy ny fahatsapana ny valin'ny PCR ary afaka manitatra modely saro-takarina amin'ny votoatin'ny GC avo, rafitra faharoa ary ny toy izany. Raha ambany ny dika mitovy amin'ny lasibatra kendrena 2 dia azo haamafisina, hiantohana ny valim-panandramana marina kokoa.

■ Ny fampiasa Taq Platinum MasterMix tsy manam-paharoa mahatonga ny rafitry ny fihetsika iray ho marin-toerana tanteraka, ary ny hetsika dia tsy hisy fiantraikany amin'ny famerenam-bolo na fitehirizana maharitra amin'ny 4 ° C.

■ Ny vahaolana mifangaro PCR efa voaomana sy mahomby efa nomanina dia afaka manao ny asa haingana sy tsotra, mampihena be ny hamafin'ny asa sy ny hadisoana amin'ny santionany. Ny enhancer sy optimizer PCR avo lenta dia tafiditra ao anaty mix ihany koa, izay mampihena ny fepetra takiana amin'ny toe-javatra PCR.

■ Ity vokatra ity dia samy manana rafitra misy loko sy tsy misy loko. Ireo vokatra MasterMix misy loko dia azo alefa mivantana aorian'ny PCR, tsy ampiana buffer enta-mavesatra.

Fampiharana

Izy io dia afaka manolo ny polymerase Pfu hanamafisana ny vokatra azo itokisana avo lenta avy amin'ny maodely sarotra toy ny genome, ary mety amin'ny fampiharana toy ny fanangonana ny fototarazon'ny fitenenana, fiovan'ny toetr'andro manokana ary ny famakafakana ny polymorphism nukleotide tokana (SNP), sns.

Fitandremana amin'ny famolavolana Primer PCR:

Ny halavan'ny primer dia matetika 20-25 mer. Na izany aza, rehefa manao sombina PCR lava, ny halavan'ny primer dia tokony hampitomboina 30-35 mer.

■ Tsy misy fampifangaroana mifangaro eo anelanelan'ny primera roa, indrindra ho an'ny toby 3 farany amin'ny faran'ny 3 '.

■ Ny atiny GC dia tokony ho 50-60%, ary ialao ny GC na AT manankarena eo an-toerana. Mba hahafahana miorina mafy ny primer sy ny template dia sorohy ny firafitra manankarena AT amin'ny faran'ny 3 ′.

■ Sorohy ny primer mba hamorona rafitra faharoa.

■ Misafidiana primera roa miaraka amin'ny mari-pana Tm mifanakaiky.

Kajy ny sandan'ny Tm an'ny primer ho an'ny PCR:

■ Rehefa latsaky ny 20 mer ny primer dia: Tm = 2 ° C × (A + T) + 4 ° C × (G + C).

■ Rehefa mihoatra ny 20 mer ny primer: Tm = 81.5 + 0.41 × (GC%) - 600 / L, izay L ny halavan'ny primer.

■ Apetraho amin'ny (Tm-5) ° C ny mari-pana annealing.

Fidirana Primer PCR

Ny fifantohana farany mety amin'ny primers dia azo fidina eo anelanelan'ny 0.1 μM sy 1.0 μM. Ny fatran'ny primer ambany loatra dia mitarika amin'ny vokatra ambany amin'ny vokatra fanamafisana, raha toa ka avo loatra ny fifantohana primer dia mora kokoa amin'ny fanamafisana tsy voafaritra. Matetika, raha ny habetsahan'ny ADN misy template na lehibe dia sarotra ny ADN (toy ny ADN genome olombelona) ampiasaina ho modely, dia tokony ho ambany ny fifantohana voalohany. Rehefa ny habetsaky ny ADN template dia kely na tsotra template ADN (oh: plasmid ADN, sns.) Ampiasaina ho modely, dia tokony ho avo kokoa ny fifantohana voalohany.

Ny vokatra rehetra dia azo namboarina ho an'ny ODM / OEM. Ho an'ny antsipiriany,azafady tsindrio ny Serivisy namboarina (ODM / OEM)


  • Teo aloha:
  • Manaraka:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental ExampleExperimental Example Mampiasà ADN genomika ho modely hanamafisana ny sombim-bary 1 kb. Aorian'ny fanehoan-kevitry ny PCR dia makà 5 μl hahitana ny electrophoresis.
    F: Tsy misy tarika fanamafisana

    Modely A-1

    ■ Ny môdely dia misy fahalotoana proteinina na mpanakana Taq, sns .——Ataovy ny môdely ADN, esory ny fahalotoan'ny proteinina na esory ny modely ADN miaraka amina kitapo fanadiovana.

    ■ Tsy feno ny denaturation an'ny môdely —— Ampitomboina araka ny tokony ho izy ny mari-pana amin'ny denaturation ary halavaina ny fotoana maha-denaturation.

    ■ Fanimbana ny môdely —— Amboary indray ny modely.

    A-2 Primer

    ■ Ratsy kalitaon'ny primera ——Avao-synthesize ny primer.

    ■ Fanapotehana ny primer ——Aokao ireo primera fitanana avo lenta ho kely kely hitehirizana azy. Sorohy ny hatsiaka be loatra sy ny fanalefaka na 4 ° C maharitra maharitra.

    ■ Famolavolana primer tsy mety (oh: ny halavan'ny primer tsy ampy, dimer miforona eo anelanelan'ny primers sns.

    A-3 Mg2+fitanana

    ■ Mg2+ ambany loatra ny fifantohana —— Ampitomboy tsara ny Mg2+ fifantohana: Manatsara ny Mg2+ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra2+ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

    A-4 mari-pana amin'ny Annealing

    ■ Ny mari-pana amin'ny annealing avo dia misy fiatraikany amin'ny famehezana ny primer sy ny modely. ——Ahena ny mari-pana mampifangaro ary manatsara ny toe-javatra amin'ny alàlan'ny gradient 2 ° C.

    A-5 Fotoana fanitarana

    ■ Fotoana fanitarana fohy —— Ampitomboy ny fotoana fanitarana.

    F: Diso tsara

    Phenomena: ny santionany ratsy dia mampiseho ireo tarika lasibatra kendrena.

    A-1 Fandotoana ny PCR

    ■ Fandotoana ny filaharan'ny tanjona na ny fanamafisana ny vokatra —— Tandremo sao ampifangaroina ny santionany misy ny filaharana kendrena ao amin'ilay santionany ratsy na arotsaka ao anaty fantsona centrifuge. Ny reagents na ny fitaovana dia tokony autoclaved hamongorana ny asidra niokika misy, ary ny fisian'ny fandotoana dia tokony ho faritana amin'ny alàlan'ny fanandramana fanaraha-maso ratsy.

    ■ Fandotoana reagent ——Aroquot ny reagents ary tahirizo amin'ny hafanana ambany.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ ambany loatra ny fifantohana —— Ampitomboy tsara ny Mg2+ fifantohana: Manatsara ny Mg2+ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra2+ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

    ■ Famolavolana primer tsy mety, ary ny filaharana kendrena dia misy homolojia miaraka amin'ny filaharana tsy kendrena. —— primera famolavolana indray.

    F: fanamafisana tsy voafaritra

    Phenomena: Ny tariby fanamafisana PCR dia tsy mifanaraka amin'ny haben'ny antenaina, na lehibe na kely, na indraindray samy misy tarika fanamafisana manokana sy tarika fanamafisana tsy voafaritra.

    Primer A-1

    ■ Tsy fahaiza-manao voalohany

    —— Primera famolavolana indray.

    ■ Avo loatra ny fatran'ny primer ——Mampiakatra tsara ny mari-pana amin'ny denaturation ary mampaharitra ny fotoana maha-denaturation.

    A-2 Mg2+ fitanana

    ■ Ny Mg2+ avo loatra ny fifantohana ——Ahenao tsara ny fatran'ny Mg2 +: Manatsara ny Mg2+ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra2+ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

    A-3 Polymerase maharitra

    ■ Fatra anzima tafahoatra ——Mampihena ny habetsaky ny anzima amin'ny elanelam-potoana 0,5 U.

    A-4 mari-pana amin'ny Annealing

    ■ Ambany loatra ny mari-pana amin'ny rindrambaiko —— Ampitomboy amin'ny tokony ho izy ny mari-pana fampidirana an-trano na ampiharo ny fomba fanaingoana dingana roa

    Kitapo PCR A-5

    ■ Kitapo PCR be loatra ——Mampihena ny isan'ireo tsingerina PCR.

    F: Tarika mitambatra na manosotra

    Primer A-1——Miavaka manokana —— Mamolavola indray ny primer, manova ny toerana sy ny halavan'ny primer hanatsarana ny mampiavaka azy; na manao PCR akany.

    ADN modely A-2

    ——Tsy madio ny môdely ——Ataovy ny môdely na esory ny ADN miaraka amin'ny kitapo fanadiovana.

    A-3 Mg2+ fitanana

    ——Mg2+ avo loatra ny fifantohana ——Ahenao tsara ny Mg2+ fifantohana: Manatsara ny Mg2+ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra2+ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

    A-4 dNTP

    ——Ny haavon'ny dNTP dia avo loatra ——Mampihena araka ny tokony ho izy ny fifantohan'ny dNTP

    A-5 mari-pana amin'ny Annealing

    ——Tena ambany ny mari-pana amin'ny fanaingoana —— Ampitomboy amin'ny tokony ho izy ny mari-pana amin'ny fampidirana annealing

    A-6 tsingerina

    ——Toy ny tsingerina be loatra—— Araraoty ny isan'ny tsingerina

    F: Ohatrinona ny ADN modely tokony ampiana ao anaty rafitra fanehoan-kevitra 50 μl PCR?
    ytry
    F: Ahoana ny fanamafisana ireo sombina lava?

    Ny dingana voalohany dia ny mifidy ny polymerase mety. Ny polymerase Taq tsy tapaka dia tsy afaka manamboatra noho ny tsy fisian'ny hetsika exonuclease 3'-5 ', ary ny tsy fitoviana dia hampihena ny fahombiazan'ny sombintsombiny. Noho izany, ny polymerase Taq mahazatra dia tsy afaka manatsara ny sombiny kendrena lehibe kokoa noho ny 5 kb. Taq polymerase miaraka amina fanovana manokana na polymerase fidelity avo lenta hafa dia tokony hofidina hanatsarana ny fahombiazan'ny fanitarana ary hahafeno ny filan'ny fanamafisana sombina lava. Ho fanampin'izany, ny fanamafisana ireo sombintsombiny lava dia mitaky fanitsiana mifanaraka amin'ny famolavolana primer, ny vanim-potoana denaturation, ny fotoana fanitarana, ny buffer pH, sns. Matetika, ny primera misy 18-24 bp dia mety hitarika vokatra tsara kokoa. Mba hisorohana ny fahasimban'ny môdely dia tokony ahena ho 30 seg na latsaka isaky ny tsingerina ny fotoana anaran'ny denaturation, ary ny fotoana hampiakarana ny maripana mankany 94 ° C alohan'ny tokony hampitomboana 1 min. Ankoatr'izay, ny fametrahana ny mari-pana fanitarana eo amin'ny 68 ° C ary ny famolavolana ny fotoana fanitarana arakaraka ny tahan'ny 1 kb / min dia afaka miantoka ny fanamafisana ny sombiny lava.

    F: Ahoana no hanatsarana ny fahatokisan'ny PCR?

    Ny tahan'ny lesoka amin'ny fanamafisana PCR dia azo ahena amin'ny alàlan'ny fampiasana polymerases ADN isan-karazany miaraka amin'ny fahamendrehana ambony. Anisan'ireo polymerase Taq ADN hita hatreto, ny anzima Pfu dia manana ny tahan'ny lesoka ambany indrindra sy ny fahatokiana avo indrindra (jereo ny tabilao mifatotra). Ankoatry ny fifantina anzima, ny mpikaroka dia afaka mampihena bebe kokoa ny tahan'ny mutation PCR amin'ny alàlan'ny fanatsarana ny fepetra fanehoan-kevitra, ao anatin'izany ny fanamafisana ny fomban'ny buffer, ny fatran'ny polymerase azo hafanaina ary ny fanamafisana ny isa amin'ny tsingerina PCR.

    Soraty eto ny hafatrao ary andefaso aminay