Kit PCR Ultra HiFidelity

Fahamendrehana avo lenta, famaritana avo lenta ary faran'izay avo lenta PCR premix.

Ultra HiFidelity PCR Kit dia premium fanamafisana PCR avo lenta avo lenta mety amin'ny klona sy detection mifandraika amin'ny PCR. Ny Polymerase ADN Ultra HiFi misy ao anatin'ilay kitapo dia polymerase ADN haingana sy tsy miovaova izay novolavolain'ny teknolojia fivoaran'ny molekiola. Manatsara ny fitovizan'ny polymerase ADN amin'ny maodely, manatsara ny hafainganana mihamitombo sy ny fahaizan'ny extension ny anzima, ary mampitombo ny taham-pahombiazan'ny vokatra PCR sy ny vokatra.

Saka. tsy misy	Haben'ny fonosana
4992970	1ml
4992971	5 * 1ml
4992978	5 * 5 * 1ml

Mandefasa mailaka aminay

Product Detail

Ohatra amin'ny fanandramana

FAQ

Product Tags

Toetoetra

■ Mora miasa: Ity kit ity dia omena ho 2 × premix, ary PCR dia azo tanterahina amin'ny fampidirana modely sy primera fotsiny.
■ Fahamendrehana avo lenta: ny fahatokisana dia avo 50 heny noho ny Taq polymerase.
■ Famaritana avo lenta: fampisehoana an-tsehatra tena tsara hanombohana ny famaritana ny vokatra ..
■ Fanamafisana haingana: ny hafainganam-pandeha mety hahatratra 10-15 seg / kb.
■ Extensibility mahery: sombina ADN hatramin'ny 20 kb no azo nohamafisina.
■ Fampiharana marobe: Ny kitapo dia misy PCR Enhancer ary mety amin'ny fanamafisana ny maodely GC avo lenta sy sarotra.

famaritana

Karazana: Polymerase DNA tsy fivadihana
Hafainganana amin'ny fanamafisana: 10-15 sec / kb
Haben'ny sombintsombiny: <20kb
Fampiharana: fanamafisana PCR avo lenta, fananganana klônika, fanamafisana endrika maodely GC, fanamafisana ny fototarazon'ny genome sarotra, fanamafisana ny fahatokisana avo lenta ny cDNA, fitiliana SNP, fanovana manokana ny tranokala, sns.
Ny fitrandrahana ADN dia azo avy amin'ny karazan-javamaniry isan-karazany:
Fanamarihana: miankina amin'ny karazana santionany ny vokatra ADN. Ny fitaovana rehetra etsy ambony dia avy amin'ny ravina malemy.

Ny vokatra rehetra dia azo namboarina ho an'ny ODM / OEM. Ho an'ny antsipiriany,azafady tsindrio ny Serivisy namboarina (ODM / OEM)

Teo aloha: 2 × Pfu PCR Mix

Manaraka: Kitapo QuantScript RT

	Fanombohana mafana mba hiantohana ny famaritana ny vokatra Sary 1. Ultra HiFi dia manana lahasa-panombohana tena tsara hanombohana ny famaritana ny vokatra fanamafisana. Ny fomba fanilo mololozika dia napetraka (Ma et al., Anal Biochem, 2006).
	Fahatokiana avo lenta tsara, avo 50 heny noho ny Taq Polymerase Sary 2. Ny tsy fivadihan'ny Ultra HiFi dia avo 50 heny noho ny an'ny polymerase Taq mahazatra. Ny tsy fivadihan'ny polymerization an'ny Taq polymerase (tsy misy hetsika fanitsiana) dia ampiasaina ho referansa.
	Ny fanamafisana haingana sy ny sombiny lava dia azo havaozina haingana Fig. 3. Ultra HiFi dia afaka manitatra hatramin'ny 5 sec / kb ho an'ireo sombina kely kokoa noho ny 4 kb. Ho an'ny sombintsombiny lava, ny fotoana fanamafisana dia mety hitarina amin'ny fomba mety. Ho an'ny sombin-javatra mihoatra ny 15 kb, ny halavany dia mety hahatratra 30 sec / kb. M: TIANGEN D15000 Marker
	Universality matanjaka sy miavaka manokana, mora vakiana GC avo sy sombina lava amin'ny loharano samihafa Sary 4. Ultra HiFi dia manana fahamendrehana avo lenta mba hahazoana antoka ny tahan'ny fahombiazan'ny amplification sy ny habetsaky ny vokatra ho an'ny karazana modely samihafa. A. valiny fanamafisana Ultra HiFi B. valiny fanamafisana anzima Hi-Fi an'ny mpamatsy K C. valiny fanamafisana anzima Hi-Fi an'ny mpamatsy N M: TIANGEN D15000 Marker Lalana 1-5. Valin'ny fanamafisana ny maodely misy halava samy hafa: 1. 750 bp; 2. 1 kb; 3. 2 kb; 4. 4 kb; 5. 6 kb Lane 6. Valim-panamafisana ny maodely GC avo lenta: 1915 bp (GC%: 70%); Lane 7-11. Valim-panamafisana ny modely 2 kb avy amin'ny génome isan-karazany: 7. Rat; 8. Vary; 9. Vary; 10. katsaka; 11. Bakteria; Lalana 12-14. Vokatry ny fanamafisana ny sombiny 8 kb: 12. Vary; 13. katsaka;

F: Tsy misy tarika fanamafisana

Modely A-1

■ Ny môdely dia misy fahalotoana proteinina na mpanakana Taq, sns .——Ataovy ny môdely ADN, esory ny fahalotoan'ny proteinina na esory ny modely ADN miaraka amina kitapo fanadiovana.

■ Tsy feno ny denaturation an'ny môdely —— Ampitomboina araka ny tokony ho izy ny mari-pana amin'ny denaturation ary halavaina ny fotoana maha-denaturation.

■ Fanimbana ny môdely —— Amboary indray ny modely.

A-2 Primer

■ Ratsy kalitaon'ny primera ——Avao-synthesize ny primer.

■ Fanapotehana ny primer ——Aokao ireo primera fitanana avo lenta ho kely kely hitehirizana azy. Sorohy ny hatsiaka be loatra sy ny fanalefaka na 4 ° C maharitra maharitra.

■ Famolavolana primer tsy mety (oh: ny halavan'ny primer tsy ampy, dimer miforona eo anelanelan'ny primers sns.

A-3 Mg²⁺fitanana

■ Mg²⁺ ambany loatra ny fifantohana —— Ampitomboy tsara ny Mg²⁺fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-4 mari-pana amin'ny Annealing

■ Ny mari-pana amin'ny annealing avo dia misy fiatraikany amin'ny famehezana ny primer sy ny modely. ——Ahena ny mari-pana mampifangaro ary manatsara ny toe-javatra amin'ny alàlan'ny gradient 2 ° C.

A-5 Fotoana fanitarana

■ Fotoana fanitarana fohy —— Ampitomboy ny fotoana fanitarana.

F: Diso tsara

Phenomena: ny santionany ratsy dia mampiseho ireo tarika lasibatra kendrena.

A-1 Fandotoana ny PCR

■ Fandotoana ny filaharan'ny tanjona na ny fanamafisana ny vokatra —— Tandremo sao ampifangaroina ny santionany misy ny filaharana kendrena ao amin'ilay santionany ratsy na arotsaka ao anaty fantsona centrifuge. Ny reagents na ny fitaovana dia tokony autoclaved hamongorana ny asidra niokika misy, ary ny fisian'ny fandotoana dia tokony ho faritana amin'ny alàlan'ny fanandramana fanaraha-maso ratsy.

■ Fandotoana reagent ——Aroquot ny reagents ary tahirizo amin'ny hafanana ambany.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ ambany loatra ny fifantohana —— Ampitomboy tsara ny Mg²⁺ fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

■ Famolavolana primer tsy mety, ary ny filaharana kendrena dia misy homolojia miaraka amin'ny filaharana tsy kendrena. —— primera famolavolana indray.

F: fanamafisana tsy voafaritra

Phenomena: Ny tariby fanamafisana PCR dia tsy mifanaraka amin'ny haben'ny antenaina, na lehibe na kely, na indraindray samy misy tarika fanamafisana manokana sy tarika fanamafisana tsy voafaritra.

Primer A-1

■ Tsy fahaiza-manao voalohany

—— Primera famolavolana indray.

■ Avo loatra ny fatran'ny primer ——Mampiakatra tsara ny mari-pana amin'ny denaturation ary mampaharitra ny fotoana maha-denaturation.

A-2 Mg²⁺ fitanana

■ Ny Mg²⁺ avo loatra ny fifantohana ——Ahenao tsara ny fatran'ny Mg2 +: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-3 Polymerase maharitra

■ Fatra anzima tafahoatra ——Mampihena ny habetsaky ny anzima amin'ny elanelam-potoana 0,5 U.

A-4 mari-pana amin'ny Annealing

■ Ambany loatra ny mari-pana amin'ny rindrambaiko —— Ampitomboy amin'ny tokony ho izy ny mari-pana fampidirana an-trano na ampiharo ny fomba fanaingoana dingana roa

Kitapo PCR A-5

■ Kitapo PCR be loatra ——Mampihena ny isan'ireo tsingerina PCR.

F: Tarika mitambatra na manosotra

Primer A-1——Miavaka manokana —— Mamolavola indray ny primer, manova ny toerana sy ny halavan'ny primer hanatsarana ny mampiavaka azy; na manao PCR akany.

ADN modely A-2

——Tsy madio ny môdely ——Ataovy ny môdely na esory ny ADN miaraka amin'ny kitapo fanadiovana.

A-3 Mg²⁺ fitanana

——Mg²⁺ avo loatra ny fifantohana ——Ahenao tsara ny Mg²⁺ fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-4 dNTP

——Ny haavon'ny dNTP dia avo loatra ——Mampihena araka ny tokony ho izy ny fifantohan'ny dNTP

A-5 mari-pana amin'ny Annealing

——Tena ambany ny mari-pana amin'ny fanaingoana —— Ampitomboy amin'ny tokony ho izy ny mari-pana amin'ny fampidirana annealing

A-6 tsingerina

——Toy ny tsingerina be loatra—— Araraoty ny isan'ny tsingerina

F: Ohatrinona ny ADN modely tokony ampiana ao anaty rafitra fanehoan-kevitra 50 μl PCR?

F: Ahoana ny fanamafisana ireo sombina lava?

Ny dingana voalohany dia ny mifidy ny polymerase mety. Ny polymerase Taq tsy tapaka dia tsy afaka manamboatra noho ny tsy fisian'ny hetsika exonuclease 3'-5 ', ary ny tsy fitoviana dia hampihena ny fahombiazan'ny sombintsombiny. Noho izany, ny polymerase Taq mahazatra dia tsy afaka manatsara ny sombiny kendrena lehibe kokoa noho ny 5 kb. Taq polymerase miaraka amina fanovana manokana na polymerase fidelity avo lenta hafa dia tokony hofidina hanatsarana ny fahombiazan'ny fanitarana ary hahafeno ny filan'ny fanamafisana sombina lava. Ho fanampin'izany, ny fanamafisana ireo sombintsombiny lava dia mitaky fanitsiana mifanaraka amin'ny famolavolana primer, ny vanim-potoana denaturation, ny fotoana fanitarana, ny buffer pH, sns. Matetika, ny primera misy 18-24 bp dia mety hitarika vokatra tsara kokoa. Mba hisorohana ny fahasimban'ny môdely dia tokony ahena ho 30 seg na latsaka isaky ny tsingerina ny fotoana anaran'ny denaturation, ary ny fotoana hampiakarana ny maripana mankany 94 ° C alohan'ny tokony hampitomboana 1 min. Ankoatr'izay, ny fametrahana ny mari-pana fanitarana eo amin'ny 68 ° C ary ny famolavolana ny fotoana fanitarana arakaraka ny tahan'ny 1 kb / min dia afaka miantoka ny fanamafisana ny sombiny lava.

F: Ahoana no hanatsarana ny fahatokisan'ny PCR?

Ny tahan'ny lesoka amin'ny fanamafisana PCR dia azo ahena amin'ny alàlan'ny fampiasana polymerases ADN isan-karazany miaraka amin'ny fahamendrehana ambony. Anisan'ireo polymerase Taq ADN hita hatreto, ny anzima Pfu dia manana ny tahan'ny lesoka ambany indrindra sy ny fahatokiana avo indrindra (jereo ny tabilao mifatotra). Ankoatry ny fifantina anzima, ny mpikaroka dia afaka mampihena bebe kokoa ny tahan'ny mutation PCR amin'ny alàlan'ny fanatsarana ny fepetra fanehoan-kevitra, ao anatin'izany ny fanamafisana ny fomban'ny buffer, ny fatran'ny polymerase azo hafanaina ary ny fanamafisana ny isa amin'ny tsingerina PCR.

Soraty eto ny hafatrao ary andefaso aminay