Kitapo PCR mivantana an'ny tisy

Fanamafisana haingana ny gèner target mivantana avy amin'ny santionan'ny biby tsy misy fitrandrahana.

Ny Mouse Tissue Direct PCR Kit dia mandray endrika famonosana tokana izay misy ireo reagents rehetra amin'ny fanomanana ADN genomika haingana sy ny fanamafisana PCR. Izy io dia azo ampiharina amin'ny fanadiovana ADN genome dingana iray avy amin'ny tady totozy (rambo, sofina sy rantsan-tongotra) ary ny fanamafisana PCR sy fanaraha-maso. Ny dingana iray manontolo dia tsy misy ny homogenisation, ny fanapotehana, ny fandevonan-kanina mandritra ny alina, ny fitrandrahana solvent organika, ny rotsakorana etanol na ny dingana fanadiovana amin'ny tsanganana. Ny valiny marin-toerana dia azo alaina amin'ny fandidiana tsotra sy haingana.

Ny 2 × Dir PCR MasterMix nomen'ity kitapo ity dia reagent PCR mifanentana be izay afaka manatsara tsara ny ADN nefa tsy mila manala ireo loto toy ny proteinina. Ity reagent ity dia misy fanombohana miovaova fanefitry ny antibodyTaq Polymerase ADN, dNTPs, MgCl₂, buffer, ary koa ny enhancer, optimizer ary stabilizer ho an'ny fanehoan-kevitra PCR. Ny fanehoan-kevitry ny PCR dia azo tanterahina amin'ny fampidirana fotsiny amin'ny modely nalaina an-keriny sy ny primers manokana. Haingana, tsotra, mora tohina, manokana ary marin-toerana ny fizotrany iray, izay mety indrindra amin'ny fizahana avo lenta. Ny 2 × Dir PCR MasterMix dia misy loko elektroforesis premix, mba hahafahan'ny vokatra PCR alefa mivantana amin'ny fikarohana elektroforesis aorian'ny fanehoan-kevitra. Ny faran'ny 3 'ny vokatra PCR dia manana ta-A, izay azo ampiasaina amin'ny TA cloning.

Saka. tsy misy	Haben'ny fonosana
4992531	20 µl × 50 rxn
4992532	20 µl × 200 rxn

Mandefasa mailaka aminay

Product Detail

Workflow

Ohatra amin'ny fanandramana

FAQ

Product Tags

Toetoetra

■ Tsotra sy haingana: Ny ADN genomika dia azo esorina haingana avy amin'ny tady voalavo ao anatin'ny 60 minitra tsy misy fitotoana azota azota sy fitrandrahana solvent organika.
■ Fampiharana marobe: Mety amin'ny fitrandrahana ADN genomika iray avy amin'ny rambon'ny totozy, sofina, rantsan-tongotra ary sela hafa izy.
■ Famaritana avo lenta: Ny polymerase Taq ampiasaina amin'ity vokatra ity dia anzima miovaova fanombohana miady amin'ny antibody, miaraka amin'ny modely avo lenta sy ny maha-olona azy ary ny fanamafisana ny fanamafisana, izay mety indrindra amin'ny famaritana ny genotyping sy ny transgenic.
■ Famantarana ny fototarazo: Mora miasa ny vokatra misy valiny azo antoka, ary mety indrindra amin'ny famakafakana avo lenta sy ny fitiliana ny tavy amin'ny totozy

Ny vokatra rehetra dia azo namboarina ho an'ny ODM / OEM. Ho an'ny antsipiriany,azafady tsindrio ny Serivisy namboarina (ODM / OEM)

Teo aloha: Kitapo PCR mivantana

Manaraka: Kit Mutagenesis mitarika tranokala haingana

Experimental Example

Mampiasa Mouse Tissue Direct PCR Kit sy vokatra mifandraika amin'ny mpamatsy A mba hanamafisana ny sombintsombiny 1000 bp, 2000 bp ary 3000 bp avy amin'ny rambon'ny totozy, sofina toto ary rambo voalavo. Ny valiny dia naneho fa ny Mouse Tissue Direct PCR Kit dia manana ny tahan'ny famaritana sy ny tahan'ny fahombiazana.

F: Tsy misy tarika fanamafisana

Modely A-1

■ Ny môdely dia misy fahalotoana proteinina na mpanakana Taq, sns .——Ataovy ny môdely ADN, esory ny fahalotoan'ny proteinina na esory ny modely ADN miaraka amina kitapo fanadiovana.

■ Tsy feno ny denaturation an'ny môdely —— Ampitomboina araka ny tokony ho izy ny mari-pana amin'ny denaturation ary halavaina ny fotoana maha-denaturation.

■ Fanimbana ny môdely —— Amboary indray ny modely.

A-2 Primer

■ Ratsy kalitaon'ny primera ——Avao-synthesize ny primer.

■ Fanapotehana ny primer ——Aokao ireo primera fitanana avo lenta ho kely kely hitehirizana azy. Sorohy ny hatsiaka be loatra sy ny fanalefaka na 4 ° C maharitra maharitra.

■ Famolavolana primer tsy mety (oh: ny halavan'ny primer tsy ampy, dimer miforona eo anelanelan'ny primers sns.

A-3 Mg²⁺fitanana

■ Mg²⁺ ambany loatra ny fifantohana —— Ampitomboy tsara ny Mg²⁺fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-4 mari-pana amin'ny Annealing

■ Ny mari-pana amin'ny annealing avo dia misy fiatraikany amin'ny famehezana ny primer sy ny modely. ——Ahena ny mari-pana mampifangaro ary manatsara ny toe-javatra amin'ny alàlan'ny gradient 2 ° C.

A-5 Fotoana fanitarana

■ Fotoana fanitarana fohy —— Ampitomboy ny fotoana fanitarana.

F: Diso tsara

Phenomena: ny santionany ratsy dia mampiseho ireo tarika lasibatra kendrena.

A-1 Fandotoana ny PCR

■ Fandotoana ny filaharan'ny tanjona na ny fanamafisana ny vokatra —— Tandremo sao ampifangaroina ny santionany misy ny filaharana kendrena ao amin'ilay santionany ratsy na arotsaka ao anaty fantsona centrifuge. Ny reagents na ny fitaovana dia tokony autoclaved hamongorana ny asidra niokika misy, ary ny fisian'ny fandotoana dia tokony ho faritana amin'ny alàlan'ny fanandramana fanaraha-maso ratsy.

■ Fandotoana reagent ——Aroquot ny reagents ary tahirizo amin'ny hafanana ambany.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ ambany loatra ny fifantohana —— Ampitomboy tsara ny Mg²⁺ fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

■ Famolavolana primer tsy mety, ary ny filaharana kendrena dia misy homolojia miaraka amin'ny filaharana tsy kendrena. —— primera famolavolana indray.

F: fanamafisana tsy voafaritra

Phenomena: Ny tariby fanamafisana PCR dia tsy mifanaraka amin'ny haben'ny antenaina, na lehibe na kely, na indraindray samy misy tarika fanamafisana manokana sy tarika fanamafisana tsy voafaritra.

Primer A-1

■ Tsy fahaiza-manao voalohany

—— Primera famolavolana indray.

■ Avo loatra ny fatran'ny primer ——Mampiakatra tsara ny mari-pana amin'ny denaturation ary mampaharitra ny fotoana maha-denaturation.

A-2 Mg²⁺ fitanana

■ Ny Mg²⁺ avo loatra ny fifantohana ——Ahenao tsara ny fatran'ny Mg2 +: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-3 Polymerase maharitra

■ Fatra anzima tafahoatra ——Mampihena ny habetsaky ny anzima amin'ny elanelam-potoana 0,5 U.

A-4 mari-pana amin'ny Annealing

■ Ambany loatra ny mari-pana amin'ny rindrambaiko —— Ampitomboy amin'ny tokony ho izy ny mari-pana fampidirana an-trano na ampiharo ny fomba fanaingoana dingana roa

Kitapo PCR A-5

■ Kitapo PCR be loatra ——Mampihena ny isan'ireo tsingerina PCR.

F: Tarika mitambatra na manosotra

Primer A-1——Miavaka manokana —— Mamolavola indray ny primer, manova ny toerana sy ny halavan'ny primer hanatsarana ny mampiavaka azy; na manao PCR akany.

ADN modely A-2

——Tsy madio ny môdely ——Ataovy ny môdely na esory ny ADN miaraka amin'ny kitapo fanadiovana.

A-3 Mg²⁺ fitanana

——Mg²⁺ avo loatra ny fifantohana ——Ahenao tsara ny Mg²⁺ fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-4 dNTP

——Ny haavon'ny dNTP dia avo loatra ——Mampihena araka ny tokony ho izy ny fifantohan'ny dNTP

A-5 mari-pana amin'ny Annealing

——Tena ambany ny mari-pana amin'ny fanaingoana —— Ampitomboy amin'ny tokony ho izy ny mari-pana amin'ny fampidirana annealing

A-6 tsingerina

——Toy ny tsingerina be loatra—— Araraoty ny isan'ny tsingerina

F: Ohatrinona ny ADN modely tokony ampiana ao anaty rafitra fanehoan-kevitra 50 μl PCR?

F: Ahoana ny fanamafisana ireo sombina lava?

Ny dingana voalohany dia ny mifidy ny polymerase mety. Ny polymerase Taq tsy tapaka dia tsy afaka manamboatra noho ny tsy fisian'ny hetsika exonuclease 3'-5 ', ary ny tsy fitoviana dia hampihena ny fahombiazan'ny sombintsombiny. Noho izany, ny polymerase Taq mahazatra dia tsy afaka manatsara ny sombiny kendrena lehibe kokoa noho ny 5 kb. Taq polymerase miaraka amina fanovana manokana na polymerase fidelity avo lenta hafa dia tokony hofidina hanatsarana ny fahombiazan'ny fanitarana ary hahafeno ny filan'ny fanamafisana sombina lava. Ho fanampin'izany, ny fanamafisana ireo sombintsombiny lava dia mitaky fanitsiana mifanaraka amin'ny famolavolana primer, ny vanim-potoana denaturation, ny fotoana fanitarana, ny buffer pH, sns. Matetika, ny primera misy 18-24 bp dia mety hitarika vokatra tsara kokoa. Mba hisorohana ny fahasimban'ny môdely dia tokony ahena ho 30 seg na latsaka isaky ny tsingerina ny fotoana anaran'ny denaturation, ary ny fotoana hampiakarana ny maripana mankany 94 ° C alohan'ny tokony hampitomboana 1 min. Ankoatr'izay, ny fametrahana ny mari-pana fanitarana eo amin'ny 68 ° C ary ny famolavolana ny fotoana fanitarana arakaraka ny tahan'ny 1 kb / min dia afaka miantoka ny fanamafisana ny sombiny lava.

F: Ahoana no hanatsarana ny fahatokisan'ny PCR?

Ny tahan'ny lesoka amin'ny fanamafisana PCR dia azo ahena amin'ny alàlan'ny fampiasana polymerases ADN isan-karazany miaraka amin'ny fahamendrehana ambony. Anisan'ireo polymerase Taq ADN hita hatreto, ny anzima Pfu dia manana ny tahan'ny lesoka ambany indrindra sy ny fahatokiana avo indrindra (jereo ny tabilao mifatotra). Ankoatry ny fifantina anzima, ny mpikaroka dia afaka mampihena bebe kokoa ny tahan'ny mutation PCR amin'ny alàlan'ny fanatsarana ny fepetra fanehoan-kevitra, ao anatin'izany ny fanamafisana ny fomban'ny buffer, ny fatran'ny polymerase azo hafanaina ary ny fanamafisana ny isa amin'ny tsingerina PCR.

Soraty eto ny hafatrao ary andefaso aminay