Kit Mutagenesis mitarika tranokala haingana

Fiovan'ny tranokala haingana na tranonkala marobe eo amin'ny génie kendrena ao amin'ny vector target.

Ny mutagenesis tarihin'ny tranokala in vitro dia fomba fanandramana lehibe amin'ny sehatry ny biolojia sy ny fitsaboana isan-karazany, izay ampiasaina indrindra hanovana sy hanatsara ny fototarazo, hizaha ireo toerana misy fifehezan'ireo mpampiroborobo, ary koa handinihana ny fifandraisana sarotra misy eo amin'ny firafitry ny proteinina sy ny asany. Ny kit dia mandray ny teknolojia mitarika ankehitriny mba hanatanterahana mivantana ny mutation tranonkala tokana, ny mutation multi-site ary koa ny fidirana na ny famafana ny mutation an'ny gén target. Ny tahan'ny mutation an'ny tranokala tokana dia mety hahatratra 90%. Ho fanampin'izany, tsy toy ny kitapo fanaingoana nentim-paharazana izay mitaky fihodinan'ny PCR marobe, fanaovan-tsokajy ary dingana hafa mandany fotoana sy mandany asa, ny fiasan'ny kit dia tsotra kokoa, ary dingana efatra ihany no ilaina hanamboarana ny fihenan'ny mutant.

Saka. tsy misy	Haben'ny fonosana
44992901	20 rxn

Mandefasa mailaka aminay

Product Detail

FAQ

Product Tags

Toetoetra

■ Tsotra sy haingana: ny teknolojia dia mampiasa teknolojia fanamafisana plasmid tsy misy strand. Mila dingana 4 fotsiny izy vao hahatsapa ny fiovana avy amin'ny karazan'olom-borona mankany amin'ny tsiranoka mutant, tsy misy ny fandaniana fotoana sy ny fandaniam-potoana asa toy ny PCR boribory marobe sy ny zana-cloning.
■ Voaloham-bokatra avo lenta: Ny kit dia mandray ny fitsipiky ny famolavolana primer mifanindry, mba hahitana plasmide mutant bebe kokoa amin'ny fanamafisana.
■ Azo ampiharina be dia be: Ny kit dia tsy vitan'ny manatanteraka mutation tranonkala tokana, fa koa mutation multi-site. Afaka mutate hatramin'ny tranokala 5.
■ Mifanentana matanjaka: ny kit dia afaka manova ny fiovan'ny tranonkala amin'ny plasmid miaraka amin'ny haben'ny 10 kb, izay mandrakotra ny plasmid rehetra ampiasaina matetika.
■ Taham-panovana avo lenta: ny kit dia misy fiasan'ny fandevonan-kanina indroa modely plasmid methylated in vitro sy in vivo, miantoka ny tahan'ny mutation ambonimbony kokoa.

Fametrahana ny fiovan'ny fiovan'ny toeran-tranonkala sy ny programa PCR

■ Ho an'ny mutation multi-site primer tokana, ny tahan'ny mutation dia ho ambany noho ny mutation tranokala tokana noho ny fitomboan'ny isan'ny mutation sites. Raha ny angon-drakitra fanandramana nataonay, rehefa mahatratra 5 ny isan'ny tranom-panovana dia ahena ho 50% ny taham-piovan'ny mutation. Noho izany, amin'ity tranga ity dia ampirisihina hampitombo ny isan'ireo klone voamarina.
■ Ny kit dia manohana ny mutation multi-primer multi-site, ka ny andrana mutation dia azo tanterahina miaraka amina genes isan-karazany. Ny 5 fetra farany ambony amin'ny isan'ny tranonkala mutation dia 5 ihany.
■ Soso-kevitra ny plasmid fifehezana sy ny primer omena ao anaty kit dia tokony ampiharina rehefa manatanteraka fanandramana mutation vaovao mba hanamorana ny famakafakana ireo olana fanandramana.

Fast Site-Directed Mutagenesis Kit

Ny vokatra rehetra dia azo namboarina ho an'ny ODM / OEM. Ho an'ny antsipiriany,azafady tsindrio ny Serivisy namboarina (ODM / OEM)

Teo aloha: Kitapo PCR mivantana an'ny tisy

Manaraka: 2 × Pfu PCR Mix

F: Tsy misy tarika fanamafisana

Modely A-1

■ Ny môdely dia misy fahalotoana proteinina na mpanakana Taq, sns .——Ataovy ny môdely ADN, esory ny fahalotoan'ny proteinina na esory ny modely ADN miaraka amina kitapo fanadiovana.

■ Tsy feno ny denaturation an'ny môdely —— Ampitomboina araka ny tokony ho izy ny mari-pana amin'ny denaturation ary halavaina ny fotoana maha-denaturation.

■ Fanimbana ny môdely —— Amboary indray ny modely.

A-2 Primer

■ Ratsy kalitaon'ny primera ——Avao-synthesize ny primer.

■ Fanapotehana ny primer ——Aokao ireo primera fitanana avo lenta ho kely kely hitehirizana azy. Sorohy ny hatsiaka be loatra sy ny fanalefaka na 4 ° C maharitra maharitra.

■ Famolavolana primer tsy mety (oh: ny halavan'ny primer tsy ampy, dimer miforona eo anelanelan'ny primers sns.

A-3 Mg²⁺fitanana

■ Mg²⁺ ambany loatra ny fifantohana —— Ampitomboy tsara ny Mg²⁺fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-4 mari-pana amin'ny Annealing

■ Ny mari-pana amin'ny annealing avo dia misy fiatraikany amin'ny famehezana ny primer sy ny modely. ——Ahena ny mari-pana mampifangaro ary manatsara ny toe-javatra amin'ny alàlan'ny gradient 2 ° C.

A-5 Fotoana fanitarana

■ Fotoana fanitarana fohy —— Ampitomboy ny fotoana fanitarana.

F: Diso tsara

Phenomena: ny santionany ratsy dia mampiseho ireo tarika lasibatra kendrena.

A-1 Fandotoana ny PCR

■ Fandotoana ny filaharan'ny tanjona na ny fanamafisana ny vokatra —— Tandremo sao ampifangaroina ny santionany misy ny filaharana kendrena ao amin'ilay santionany ratsy na arotsaka ao anaty fantsona centrifuge. Ny reagents na ny fitaovana dia tokony autoclaved hamongorana ny asidra niokika misy, ary ny fisian'ny fandotoana dia tokony ho faritana amin'ny alàlan'ny fanandramana fanaraha-maso ratsy.

■ Fandotoana reagent ——Aroquot ny reagents ary tahirizo amin'ny hafanana ambany.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ ambany loatra ny fifantohana —— Ampitomboy tsara ny Mg²⁺ fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

■ Famolavolana primer tsy mety, ary ny filaharana kendrena dia misy homolojia miaraka amin'ny filaharana tsy kendrena. —— primera famolavolana indray.

F: fanamafisana tsy voafaritra

Phenomena: Ny tariby fanamafisana PCR dia tsy mifanaraka amin'ny haben'ny antenaina, na lehibe na kely, na indraindray samy misy tarika fanamafisana manokana sy tarika fanamafisana tsy voafaritra.

Primer A-1

■ Tsy fahaiza-manao voalohany

—— Primera famolavolana indray.

■ Avo loatra ny fatran'ny primer ——Mampiakatra tsara ny mari-pana amin'ny denaturation ary mampaharitra ny fotoana maha-denaturation.

A-2 Mg²⁺ fitanana

■ Ny Mg²⁺ avo loatra ny fifantohana ——Ahenao tsara ny fatran'ny Mg2 +: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-3 Polymerase maharitra

■ Fatra anzima tafahoatra ——Mampihena ny habetsaky ny anzima amin'ny elanelam-potoana 0,5 U.

A-4 mari-pana amin'ny Annealing

■ Ambany loatra ny mari-pana amin'ny rindrambaiko —— Ampitomboy amin'ny tokony ho izy ny mari-pana fampidirana an-trano na ampiharo ny fomba fanaingoana dingana roa

Kitapo PCR A-5

■ Kitapo PCR be loatra ——Mampihena ny isan'ireo tsingerina PCR.

F: Tarika mitambatra na manosotra

Primer A-1——Miavaka manokana —— Mamolavola indray ny primer, manova ny toerana sy ny halavan'ny primer hanatsarana ny mampiavaka azy; na manao PCR akany.

ADN modely A-2

——Tsy madio ny môdely ——Ataovy ny môdely na esory ny ADN miaraka amin'ny kitapo fanadiovana.

A-3 Mg²⁺ fitanana

——Mg²⁺ avo loatra ny fifantohana ——Ahenao tsara ny Mg²⁺ fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-4 dNTP

——Ny haavon'ny dNTP dia avo loatra ——Mampihena araka ny tokony ho izy ny fifantohan'ny dNTP

A-5 mari-pana amin'ny Annealing

——Tena ambany ny mari-pana amin'ny fanaingoana —— Ampitomboy amin'ny tokony ho izy ny mari-pana amin'ny fampidirana annealing

A-6 tsingerina

——Toy ny tsingerina be loatra—— Araraoty ny isan'ny tsingerina

F: Ohatrinona ny ADN modely tokony ampiana ao anaty rafitra fanehoan-kevitra 50 μl PCR?

F: Ahoana ny fanamafisana ireo sombina lava?

Ny dingana voalohany dia ny mifidy ny polymerase mety. Ny polymerase Taq tsy tapaka dia tsy afaka manamboatra noho ny tsy fisian'ny hetsika exonuclease 3'-5 ', ary ny tsy fitoviana dia hampihena ny fahombiazan'ny sombintsombiny. Noho izany, ny polymerase Taq mahazatra dia tsy afaka manatsara ny sombiny kendrena lehibe kokoa noho ny 5 kb. Taq polymerase miaraka amina fanovana manokana na polymerase fidelity avo lenta hafa dia tokony hofidina hanatsarana ny fahombiazan'ny fanitarana ary hahafeno ny filan'ny fanamafisana sombina lava. Ho fanampin'izany, ny fanamafisana ireo sombintsombiny lava dia mitaky fanitsiana mifanaraka amin'ny famolavolana primer, ny vanim-potoana denaturation, ny fotoana fanitarana, ny buffer pH, sns. Matetika, ny primera misy 18-24 bp dia mety hitarika vokatra tsara kokoa. Mba hisorohana ny fahasimban'ny môdely dia tokony ahena ho 30 seg na latsaka isaky ny tsingerina ny fotoana anaran'ny denaturation, ary ny fotoana hampiakarana ny maripana mankany 94 ° C alohan'ny tokony hampitomboana 1 min. Ankoatr'izay, ny fametrahana ny mari-pana fanitarana eo amin'ny 68 ° C ary ny famolavolana ny fotoana fanitarana arakaraka ny tahan'ny 1 kb / min dia afaka miantoka ny fanamafisana ny sombiny lava.

F: Ahoana no hanatsarana ny fahatokisan'ny PCR?

Ny tahan'ny lesoka amin'ny fanamafisana PCR dia azo ahena amin'ny alàlan'ny fampiasana polymerases ADN isan-karazany miaraka amin'ny fahamendrehana ambony. Anisan'ireo polymerase Taq ADN hita hatreto, ny anzima Pfu dia manana ny tahan'ny lesoka ambany indrindra sy ny fahatokiana avo indrindra (jereo ny tabilao mifatotra). Ankoatry ny fifantina anzima, ny mpikaroka dia afaka mampihena bebe kokoa ny tahan'ny mutation PCR amin'ny alàlan'ny fanatsarana ny fepetra fanehoan-kevitra, ao anatin'izany ny fanamafisana ny fomban'ny buffer, ny fatran'ny polymerase azo hafanaina ary ny fanamafisana ny isa amin'ny tsingerina PCR.

Soraty eto ny hafatrao ary andefaso aminay