Kitapo PCR mivantana

Fanamafisana haingana ny gén target dia mampiasa mivantana ra ho modely tsy misy fitrandrahana.

Ity kit ity dia mandray polymerase ADN anti-inhibitor vita amin'ny genetika, mba hanamafisana tsara ireo fototarazo misy kopia ao amin'ny genome olombelona. Ny rafitra buffer voatsara tsara ao amin'ity kitapo ity dia manampy ny polymerase hanohitra mafy ny fanakanana ireo mpanakanana PCR, amin'izay dia afaka manamafy mivantana ny ADN amin'ny fampiasana ra sy sela voavolavola ho modely. Mora ampiasaina ity vokatra ity ary tsy mila dingana sarotra toa ny fanadiovana ADN na ny fitsaboana alaina santionany.
Ity kit ity dia omena ho 2 × MasterMix, ary ny fanehoan-kevitra dia azo tanterahina amin'ny alàlan'ny fampidirana tsotra ny ra ra sy ny primer detection mifanaraka amin'izany. Izy io dia azo ampiharina amin'ny sela voaangona amin'ny biby mampinono toy ny olona, totozy, kisoa, omby ary karazana hafa, ary koa ra vaovao na 4 ℃ cryopreserve, anticoagulant (EDTA, citrate, heparin), lalan-drà liquefied ary rà maina voatahiry ao amin'ny karatra ara-barotra Whatman 903 sy FTA Elute.

Saka. tsy misy	Haben'ny fonosana
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

Mandefasa mailaka aminay

Product Detail

Ohatra amin'ny fanandramana

FAQ

Product Tags

Toetoetra

■ Tsotra sy haingana: ny fanamafisana PCR dia azo tanterahina mivantana amin'ny alàlan'ny rà tahaka ny maodely, tsy mila ireo dingana mandreraka amin'ny fanomanana santionany sy ny fitrandrahana ADN.
■ Fahadiovana avo lenta: ny fikojakojana ireo dingana mialoha ny fitsaboana sy ny fitrandrahana ADN dia afaka manampy amin'ny fisorohana ny fandotoana ny santionany.
■ Famoahana avo lenta: Ny famantarana ny PCR ho an'ny santionany lehibe dia azo tanterahina amin'ny alàlan'ny fampifangaroana ny kitapo amin'ny takelaka PCR 96/384-tsara.
■ Universalidad mahery: Ity kit ity dia afaka manatsara ny sombin-javatra GC na sombina amin'ny rafitra faharoa, ary ny halavan'ny fanamafisana dia mety hahatratra 5 kb.
■ Fanoherana mafy ny adin-tsaina: ity kit ity dia azo ampiharina amin'ny karazana sy santionana amin'ny ra voatahiry amin'ny fomba samihafa.

Fampiharana

Ny vokatra PCR amin'ity kitapo ity dia misy ny "A" eo amin'ny 3'-end, izay azo ampiasaina mivantana amin'ny klona ta TA. Ity kit ity dia azo ampiasaina amin'ny fanamafisana ny sombin'ny ADN genomika, ny fandalinana ny génétika avo lenta ary ny fandalinana ny genotyping (toy ny detection de gen).

Ny vokatra rehetra dia azo namboarina ho an'ny ODM / OEM. Ho an'ny antsipiriany,azafady tsindrio ny Serivisy namboarina (ODM / OEM)

Teo aloha: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Manaraka: Kitapo PCR mivantana an'ny tisy

	Amin'ny fampiasana anticoagulation EDTA olombelona ho modely, ny gène 4 miaraka amin'ny atiny GC hafa dia nohamafisin'ny Blood Direct PCR Kit. Ny rafitra fanehoan-kevitra PCR dia 20 μl, ary ra 1 μl no natao modely. M: TIANGEN Marker II; 1: haben'ny sombiny 1090 bp, atiny GC 68,1%; 2: haben'ny sombin-javatra 1915 bp, atiny GC 70,4%; 3: haben'ny sombin-javatra 448 bp, atiny GC 74,8%; 4: haben'ny sombiny 1527 bp, atiny GC 61,5%. Valin'ny fanandramana: Ny Kit Direct PCR an'ny Blood Direct dia afaka manatsara ny sombintsombin'ny ADN miaraka amin'ny atiny GC eo amin'ny 61,5% -74,8%, manondro fa mahavita manatsara ireo sombin-tsolika avo lenta GC.
	Ny fampiasana anticoagulation EDTA olombelona ho modely, ny fototarazo 5 misy halavana samy hafa (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 ary Hn4.0) dia nohamafisin'i Kit Direct PCR an'ny Blood. Ny rafitra fanehoan-kevitra PCR dia 20 μl, ary ra 1 μl no natao modely. M: TIANGEN Marker II; 1-3: santionan'ny ra 3 samihafa; NTC: fifehezana tsy misy primera. Valin'ny fanandramana: Ny Kit Direct PCR an'ny Blood Direct dia afaka manitatra sombina amin'ny halavany raha 4 kb, manondro fa mahavita manamafy sombina lava izy.
	Ny fampiasana anticoagulation EDTA olombelona ho modely, Kit Direct PCR an'ny Blood Direct dia nampiasaina mba hahitana ny santionan'ny ra isan-karazany ny PCR. Ny rafitra fanehoan-kevitra PCR dia 20 μl, ary ra 1 μl no natao modely. M: TIANGEN Marker II; 1-9: ny habetsaky ny rà dia 0,1 μl, 0,2 μl, 0,3 μl, 0,4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl ary 5 μl, samy izy avy; NTC: fifehezana tsy misy modely Valim-panandramana: Kitika mivantana ny Blood Direct PCR Kit ny ra ary afaka manamafy ny santionan'ny rà miaraka amin'ny ambaratonga 0.1-5 μl.
	Ny santionan'ny rà avy amin'ny karazan'olombelona, voalavo, akoho ary karazany hafa izay samy hafa ny fitsaboana nentiny namboarina ho modely. Blood Direct PCR Kit dia nampiasaina hanamafisana PRNP (olombelona, 750 bp), Actin (rat, 200 bp), ary β-Actin (Chicken, 1.0 kb). Ny rafitra fanehoan-kevitra PCR dia 20 μl, ary ra 1 μl no natao modely. M: TIANGEN Marker II. Valin'ny fanandramana: Ny Kit Direct PCR an'ny Blood Direct dia azo ampiharina amin'ny santionany maro isan-karazany, ary ny fikarohana PCR mivantana dia azo atao amin'ny santionan'ny rà avy amin'ny karazana isan-karazany misy fitsaboana isan-karazany.

F: Tsy misy tarika fanamafisana

Modely A-1

■ Ny môdely dia misy fahalotoana proteinina na mpanakana Taq, sns .——Ataovy ny môdely ADN, esory ny fahalotoan'ny proteinina na esory ny modely ADN miaraka amina kitapo fanadiovana.

■ Tsy feno ny denaturation an'ny môdely —— Ampitomboina araka ny tokony ho izy ny mari-pana amin'ny denaturation ary halavaina ny fotoana maha-denaturation.

■ Fanimbana ny môdely —— Amboary indray ny modely.

A-2 Primer

■ Ratsy kalitaon'ny primera ——Avao-synthesize ny primer.

■ Fanapotehana ny primer ——Aokao ireo primera fitanana avo lenta ho kely kely hitehirizana azy. Sorohy ny hatsiaka be loatra sy ny fanalefaka na 4 ° C maharitra maharitra.

■ Famolavolana primer tsy mety (oh: ny halavan'ny primer tsy ampy, dimer miforona eo anelanelan'ny primers sns.

A-3 Mg²⁺fitanana

■ Mg²⁺ ambany loatra ny fifantohana —— Ampitomboy tsara ny Mg²⁺fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-4 mari-pana amin'ny Annealing

■ Ny mari-pana amin'ny annealing avo dia misy fiatraikany amin'ny famehezana ny primer sy ny modely. ——Ahena ny mari-pana mampifangaro ary manatsara ny toe-javatra amin'ny alàlan'ny gradient 2 ° C.

A-5 Fotoana fanitarana

■ Fotoana fanitarana fohy —— Ampitomboy ny fotoana fanitarana.

F: Diso tsara

Phenomena: ny santionany ratsy dia mampiseho ireo tarika lasibatra kendrena.

A-1 Fandotoana ny PCR

■ Fandotoana ny filaharan'ny tanjona na ny fanamafisana ny vokatra —— Tandremo sao ampifangaroina ny santionany misy ny filaharana kendrena ao amin'ilay santionany ratsy na arotsaka ao anaty fantsona centrifuge. Ny reagents na ny fitaovana dia tokony autoclaved hamongorana ny asidra niokika misy, ary ny fisian'ny fandotoana dia tokony ho faritana amin'ny alàlan'ny fanandramana fanaraha-maso ratsy.

■ Fandotoana reagent ——Aroquot ny reagents ary tahirizo amin'ny hafanana ambany.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ ambany loatra ny fifantohana —— Ampitomboy tsara ny Mg²⁺ fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

■ Famolavolana primer tsy mety, ary ny filaharana kendrena dia misy homolojia miaraka amin'ny filaharana tsy kendrena. —— primera famolavolana indray.

F: fanamafisana tsy voafaritra

Phenomena: Ny tariby fanamafisana PCR dia tsy mifanaraka amin'ny haben'ny antenaina, na lehibe na kely, na indraindray samy misy tarika fanamafisana manokana sy tarika fanamafisana tsy voafaritra.

Primer A-1

■ Tsy fahaiza-manao voalohany

—— Primera famolavolana indray.

■ Avo loatra ny fatran'ny primer ——Mampiakatra tsara ny mari-pana amin'ny denaturation ary mampaharitra ny fotoana maha-denaturation.

A-2 Mg²⁺ fitanana

■ Ny Mg²⁺ avo loatra ny fifantohana ——Ahenao tsara ny fatran'ny Mg2 +: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-3 Polymerase maharitra

■ Fatra anzima tafahoatra ——Mampihena ny habetsaky ny anzima amin'ny elanelam-potoana 0,5 U.

A-4 mari-pana amin'ny Annealing

■ Ambany loatra ny mari-pana amin'ny rindrambaiko —— Ampitomboy amin'ny tokony ho izy ny mari-pana fampidirana an-trano na ampiharo ny fomba fanaingoana dingana roa

Kitapo PCR A-5

■ Kitapo PCR be loatra ——Mampihena ny isan'ireo tsingerina PCR.

F: Tarika mitambatra na manosotra

Primer A-1——Miavaka manokana —— Mamolavola indray ny primer, manova ny toerana sy ny halavan'ny primer hanatsarana ny mampiavaka azy; na manao PCR akany.

ADN modely A-2

——Tsy madio ny môdely ——Ataovy ny môdely na esory ny ADN miaraka amin'ny kitapo fanadiovana.

A-3 Mg²⁺ fitanana

——Mg²⁺ avo loatra ny fifantohana ——Ahenao tsara ny Mg²⁺ fifantohana: Manatsara ny Mg²⁺ fifantohana amina andiana fanehoan-kevitra avy amin'ny 1 mM ka hatramin'ny 3 mM miaraka amin'ny elanelam-potoana 0,5 mM hamaritana ny Mg mety indrindra²⁺ fifantohana isaky ny modely sy ny primer.

A-4 dNTP

——Ny haavon'ny dNTP dia avo loatra ——Mampihena araka ny tokony ho izy ny fifantohan'ny dNTP

A-5 mari-pana amin'ny Annealing

——Tena ambany ny mari-pana amin'ny fanaingoana —— Ampitomboy amin'ny tokony ho izy ny mari-pana amin'ny fampidirana annealing

A-6 tsingerina

——Toy ny tsingerina be loatra—— Araraoty ny isan'ny tsingerina

F: Ohatrinona ny ADN modely tokony ampiana ao anaty rafitra fanehoan-kevitra 50 μl PCR?

F: Ahoana ny fanamafisana ireo sombina lava?

Ny dingana voalohany dia ny mifidy ny polymerase mety. Ny polymerase Taq tsy tapaka dia tsy afaka manamboatra noho ny tsy fisian'ny hetsika exonuclease 3'-5 ', ary ny tsy fitoviana dia hampihena ny fahombiazan'ny sombintsombiny. Noho izany, ny polymerase Taq mahazatra dia tsy afaka manatsara ny sombiny kendrena lehibe kokoa noho ny 5 kb. Taq polymerase miaraka amina fanovana manokana na polymerase fidelity avo lenta hafa dia tokony hofidina hanatsarana ny fahombiazan'ny fanitarana ary hahafeno ny filan'ny fanamafisana sombina lava. Ho fanampin'izany, ny fanamafisana ireo sombintsombiny lava dia mitaky fanitsiana mifanaraka amin'ny famolavolana primer, ny vanim-potoana denaturation, ny fotoana fanitarana, ny buffer pH, sns. Matetika, ny primera misy 18-24 bp dia mety hitarika vokatra tsara kokoa. Mba hisorohana ny fahasimban'ny môdely dia tokony ahena ho 30 seg na latsaka isaky ny tsingerina ny fotoana anaran'ny denaturation, ary ny fotoana hampiakarana ny maripana mankany 94 ° C alohan'ny tokony hampitomboana 1 min. Ankoatr'izay, ny fametrahana ny mari-pana fanitarana eo amin'ny 68 ° C ary ny famolavolana ny fotoana fanitarana arakaraka ny tahan'ny 1 kb / min dia afaka miantoka ny fanamafisana ny sombiny lava.

F: Ahoana no hanatsarana ny fahatokisan'ny PCR?

Ny tahan'ny lesoka amin'ny fanamafisana PCR dia azo ahena amin'ny alàlan'ny fampiasana polymerases ADN isan-karazany miaraka amin'ny fahamendrehana ambony. Anisan'ireo polymerase Taq ADN hita hatreto, ny anzima Pfu dia manana ny tahan'ny lesoka ambany indrindra sy ny fahatokiana avo indrindra (jereo ny tabilao mifatotra). Ankoatry ny fifantina anzima, ny mpikaroka dia afaka mampihena bebe kokoa ny tahan'ny mutation PCR amin'ny alàlan'ny fanatsarana ny fepetra fanehoan-kevitra, ao anatin'izany ny fanamafisana ny fomban'ny buffer, ny fatran'ny polymerase azo hafanaina ary ny fanamafisana ny isa amin'ny tsingerina PCR.

Soraty eto ny hafatrao ary andefaso aminay