■ Fifanentanana avo lenta: volavolan'ny santionany fanombohana, mety amin'ny fitrandrahana santionany amin'ny habetsaky ny fihetsika iray.
■ Vokatra avo lenta: ny fomba fanamorana dia mampitombo ny vokatra RNA amin'ny santionany.
■ Fampiasana midadasika: Mety amin'ny santionany maro samihafa toy ny tavy zavamaniry sy biby, sela kolontsaina, ra, tsiranoka amin'ny vatana, sns.
■ Fandidiana haingana: Ny ADN Genomika dia azo alaina ao anatin'ny adiny 1 ..
Karazana: Miorina amin'ny orana
Santionany: Viriosy, bakteria, holatra, biby, vatan'ny zavamaniry, sela kolontsaina ary tsiranoka amin'ny vatana.
Kendrena: ARN
Fotoana iasana: ~ Adiny 1
Fampiharana: TRNzol Universal reagent dia mampihena ny fandotoana ny loto toy ny ADN sy ny proteinina ao amin'ny RNA manontolo voadio, ary azo ampiasaina mivantana amin'ny andrana biolojika molekiola isan-karazany toy ny Northern Blot, Dot Blot, fisavana PolyA, fandikana in vitro, fanadihadiana momba ny fiarovana RNase, fananganana tranomboky cDNA , RT-PCR, PCR tena izy ary filaharana avo lenta.
Ny vokatra rehetra dia azo namboarina ho an'ny ODM / OEM. Ho an'ny antsipiriany,azafady tsindrio ny Serivisy namboarina (ODM / OEM)
Fomba: tavy atiny voalavo 30 mg, ravina vary 100 mg no nangonina tamin'ny fitotoan'ny azota azota; 1 × 106Ny sela kolontsaina HepG2 sy ny mpiorina kolontsaina 700 μl Saccharomyces Cerevisiae (OD600 = 0.9) dia voaangona tamin'ny centrifugation. 1 ml an'ny TRNzol Universal Reagent avy amin'ny TIANGEN sy ireo vokatra mifandraika avy amin'ny mpamatsy L sy T dia nampiana isaky ny aliquot santionany ary ny fitrandrahana RNA dia notanterahina aorian'ny protokolola nomen'ny mpamatsy tsirairay. Ny habetsahan'ny elution dia 80 μl, 50 μl, 30 μl ary 30 μl ho an'ny santionany efatra. 3 μl an'ny eluate no nampidirina isaky ny lane.
MIII: TIANGEN Marker III;
Ny electrophoresis dia notontosaina tamin'ny 6 V / cm nandritra ny 30 minitra tamin'ny agarose 1%.
Valiny: TIANGEN TRNzol Universal Reagent dia afaka mamoaka fahadiovana avo lenta sy fahamendrehana tsara RNA avy amin'ny atin'ny rat, ravina vary, sela kolontsaina ary santionan'ny masirasira, miaraka amin'ny fahombiazana avo. Ny kalitaon'ny RNA dia azo ampitahaina na somary avo kokoa noho ny an'ny mpamatsy L sy T mpamatsy.
A-1 Cell lysis na homogenization tsy ampy
---- Ahena ny fampiasana santionany, ampitomboy ny buffer an'ny lysis, ampitomboy ny homogenization sy ny fotoana lysis.
A-2 habetsan'ny santionany dia be loatra
---- Ahena ny habetsaky ny santionany nampiasaina na mampitombo ny haben'ny buffer lysis.
A-1 Tsy fahampian'ny lysis sela na homogenisation
---- Ahena ny fampiasana santionany, ampitomboy ny buffer an'ny lysis, ampitomboy ny homogenization sy ny fotoana lysis.
A-2 habetsan'ny santionany dia be loatra
---- Azafady mba jereo ny fahaiza-manao fanodinana ambony indrindra.
A-3 RNA dia tsy voaroaka tanteraka amin'ny tsanganana
---- Aorian'ny fametahana rano RNase-Free, avelao mandritra ny minitra vitsy alohan'ny hamonoana.
A-4 Ethanol amin'ny eluent
---- Aorian'ny famafana dia arosoy indray ary esory arak'izay azo atao ny buffer fanasana.
Ny mpanelanelana amin'ny kolontsaina sela A-5 dia tsy esorina tanteraka
---- Rehefa manangona sela, azafady mba alao antoka fa esory araka izay azo atao ny mpanelanelana amin'ny kolotsaina.
A-6 Ireo sela voatahiry ao amin'ny RNAstore dia tsy voafintina tsara
---- Ny haavon'ny RNAstore dia lehibe kokoa noho ny salantsalany kolontsaina sela; noho izany dia tokony hampitomboina ny hery afovoany. Soso-kevitra ny hanome centrifuge amin'ny 3000x g.
A-7 Votoatiny RNA ambany sy be dia be ao amin'ilay santionany
---- Mampiasà santionany tsara mba hamaritana raha vokatry ny santionany ny vokatra ambany.
A-1 Tsy vaovao ny fitaovana
---- Ny tavy vaovao dia tokony tahirizina ao anaty azota azota na avy hatrany apetraka ao amin'ny reagent RNAstore mba hiantohana ny vokan'ny fitrandrahana.
A-2 habetsan'ny santionany dia be loatra
---- Ahena ny santionany.
A-3 RNase loton
---- Na dia tsy misy RNase aza ny buffer ao anaty kit dia mora ny mandoto an'i RNase mandritra ny fizotry ny fitrandrahana ary tokony hokarakaraina tsara.
A-4 Fandotoan'ny elektroforesis
---- Soloy ny buffer electrophoresis ary alao antoka fa tsy misy loto amin'ny RNase ny fanjifana sy ny buffer Loading.
A-5 Be loatra ny famoahana ho an'ny elektroforesis
---- Ahena ny habetsaky ny fandefasana santionany, ny fandefasana ny lava-drano tsirairay dia tsy tokony hihoatra ny 2 μg.
A-1 santionany dia be loatra
---- Ahena ny santionany.
A-2 Misy santionany manana atiny ADN avo ary azo tsaboina amin'ny DNase.
---- Manaova fitsaboana RNase-Free DNase amin'ny vahaolana RNA azo, ary ny RNA dia azo ampiasaina mivantana amin'ny andrana manaraka aorian'ny fitsaboana, na azo diovina amin'ny kitapo fanadiovana RNA.
Ho an'ny fitaratra fitaratra, amboarina amin'ny 150 ° C mandritra ny 4 ora. Ho an'ny kaontenera plastika, atsofoka ao anaty 0,5 M NaOH mandritra ny 10 min, avy eo hosasana tsara amin'ny rano tsy misy RNase ary esory ho esory tanteraka ny RNase. Ireo reagents na vahaolana ampiasaina amin'ny fanandramana, indrindra ny rano, dia tsy maintsy afaka amin'ny RNase. Mampiasà rano tsy misy RNase ho an'ny fanomanana reagent rehetra (ampio rano amin'ny tavoahangy fitaratra madio, ampio DEPC amin'ny fatra farany 0,1% (V / V), ahintsano mandritra ny alina ary autoclave).
Hatramin'ny nananganana azy, ny orinasanay dia namolavola vokatra kilasy voalohany manaraka ny fitsipika
ny kalitao aloha. Ny vokatray dia nahazo laza tsara eo amin'ny sehatry ny indostria sy ny valisoa eo amin'ireo mpanjifa vaovao sy taloha ..