■ Mahay manadio ny RNA avo lenta amin'ny santionany habetsaky ny habetsahan'ny taham-pahavoazana, toy ny sela bitika bitika, tavy fibra ary sela.
■ DNase tsy manam-paharoa I mampihena ny fahalotoan'ny ADN genomika.
■ Ny fahadiovana avo lenta sy vonona hampiasaina RNA dia mety amin'ny rindranasa any ambany.
■ Tsy misy fitrandrahana phenol / chloroform, tsy misy rotsakorana LiCl sy etanol, tsy mila centrifugation gradient CsCl ilaina, izay mahatonga ny fizotrany azo antoka sy azo antoka.
■ RT-PCR.
■ Avaratra Avaratra, Dot Blot.
■ PCR amin'ny ora tena izy.
■ Famakafakana sambo.
■ Screening PolyA, fandikan-teny in vitro, famakafakana fiarovana RNase ary ny fikajiana molekiola.
Ny vokatra rehetra dia azo namboarina ho an'ny ODM / OEM. Ho an'ny antsipiriany,azafady tsindrio ny Serivisy namboarina (ODM / OEM)
RNA totalin'ny 1 × 106, 1 × 105, 1 × 104, 1 × 103, 1 × 102, Sela 10 Hela no nalaina tamin'ny alàlan'ny RNAprep Pure Micro Kit. Ny RT-qPCR dia natao tamin'ny alàlan'ny Kit Quant qRT-PCR (SYBR Green) an'ny TIANGEN. |
A-1 Cell lysis na homogenization tsy ampy
---- Ahena ny fampiasana santionany, ampitomboy ny buffer an'ny lysis, ampitomboy ny homogenization sy ny fotoana lysis.
A-2 habetsan'ny santionany dia be loatra
---- Ahena ny habetsaky ny santionany nampiasaina na mampitombo ny haben'ny buffer lysis.
A-1 Tsy fahampian'ny lysis sela na homogenisation
---- Ahena ny fampiasana santionany, ampitomboy ny buffer an'ny lysis, ampitomboy ny homogenization sy ny fotoana lysis.
A-2 habetsan'ny santionany dia be loatra
---- Azafady mba jereo ny fahaiza-manao fanodinana ambony indrindra.
A-3 RNA dia tsy voaroaka tanteraka amin'ny tsanganana
---- Aorian'ny fametahana rano RNase-Free, avelao mandritra ny minitra vitsy alohan'ny hamonoana.
A-4 Ethanol amin'ny eluent
---- Aorian'ny famafana dia arosoy indray ary esory arak'izay azo atao ny buffer fanasana.
Ny mpanelanelana amin'ny kolontsaina sela A-5 dia tsy esorina tanteraka
---- Rehefa manangona sela, azafady mba alao antoka fa esory araka izay azo atao ny mpanelanelana amin'ny kolotsaina.
A-6 Ireo sela voatahiry ao amin'ny RNAstore dia tsy voafintina tsara
---- Ny haavon'ny RNAstore dia lehibe kokoa noho ny salantsalany kolontsaina sela; noho izany dia tokony hampitomboina ny hery afovoany. Soso-kevitra ny hanome centrifuge amin'ny 3000x g.
A-7 Votoatiny RNA ambany sy be dia be ao amin'ilay santionany
---- Mampiasà santionany tsara mba hamaritana raha vokatry ny santionany ny vokatra ambany.
A-1 Tsy vaovao ny fitaovana
---- Ny tavy vaovao dia tokony tahirizina ao anaty azota azota na avy hatrany apetraka ao amin'ny reagent RNAstore mba hiantohana ny vokan'ny fitrandrahana.
A-2 habetsan'ny santionany dia be loatra
---- Ahena ny santionany.
A-3 RNase loton
---- Na dia tsy misy RNase aza ny buffer ao anaty kit dia mora ny mandoto an'i RNase mandritra ny fizotry ny fitrandrahana ary tokony hokarakaraina tsara.
A-4 Fandotoan'ny elektroforesis
---- Soloy ny buffer electrophoresis ary alao antoka fa tsy misy loto amin'ny RNase ny fanjifana sy ny buffer Loading.
A-5 Be loatra ny famoahana ho an'ny elektroforesis
---- Ahena ny habetsaky ny fandefasana santionany, ny fandefasana ny lava-drano tsirairay dia tsy tokony hihoatra ny 2 μg.
A-1 santionany dia be loatra
---- Ahena ny santionany.
A-2 Misy santionany manana atiny ADN avo ary azo tsaboina amin'ny DNase.
---- Manaova fitsaboana RNase-Free DNase amin'ny vahaolana RNA azo, ary ny RNA dia azo ampiasaina mivantana amin'ny andrana manaraka aorian'ny fitsaboana, na azo diovina amin'ny kitapo fanadiovana RNA.
Ho an'ny fitaratra fitaratra, amboarina amin'ny 150 ° C mandritra ny 4 ora. Ho an'ny kaontenera plastika, atsofoka ao anaty 0,5 M NaOH mandritra ny 10 min, avy eo hosasana tsara amin'ny rano tsy misy RNase ary esory ho esory tanteraka ny RNase. Ireo reagents na vahaolana ampiasaina amin'ny fanandramana, indrindra ny rano, dia tsy maintsy afaka amin'ny RNase. Mampiasà rano tsy misy RNase ho an'ny fanomanana reagent rehetra (ampio rano amin'ny tavoahangy fitaratra madio, ampio DEPC amin'ny fatra farany 0,1% (V / V), ahintsano mandritra ny alina ary autoclave).
Hatramin'ny nananganana azy, ny orinasanay dia namolavola vokatra kilasy voalohany manaraka ny fitsipika
ny kalitao aloha. Ny vokatray dia nahazo laza tsara eo amin'ny sehatry ny indostria sy ny valisoa eo amin'ireo mpanjifa vaovao sy taloha ..